Filmen er en fiktiv gjenfortelling om slaget ved Termopylae der spartanernes kon Leonidas og hans bare 300 mann sterke hær kjemper tappert mot perserkongen Xerxes og dennes hær på over én million persere. Før kampen begynner krever perserne at de 300 skal legge ned våpnene. Leonidas svarer med frasen: "Perser! Kom og ta dem!" Følgen blir blodig og oppsiktsvekkende.