Den geniale, men gale Doktor Mabuse blir innlagt på et psykiatrisk sykehus. I omverdenen begås det gjennomtenkte avanserte forbrytelser og politiet er forvirret over kriminalitetsnivået. På sykehuset har Mabuse makt over de andre pasientene. Gjennom hypnose og manipulasjon kontrollerer han underverdenen, til tross for at han tilsynelatende ikke har kontakt med den. Doktor Mabuses testamente ble forbudt i Det tredje riket og ble Fritz Langs siste film før han flyktet fra landet etter at propagandaminister Joseph Goebbels forsøkte å arrestere ham.